Vláda Přemysla Otakara II. (v letech 1253 – 1278) je jedním z nejvýznamnějších období českých středověkých dějin, které probíhalo ve znamení hospodářského rozkvětu a zakládání nových královských měst a hradů. Panovnická moc v Říši tehdy procházela krizovým obdobím, a Přemysl usiloval o získání titulu římského krále. V počátcích své vlády bojoval s uherským králem Bélou IV. o držení Štýrska, což potvrdil svým vítězstvím v bitvě u Kressenbrunu v roce 1260. O devět let později Přemysl Otakar II. získal dědictvím po Oldřichovi Sponheimském vládu v Korutanech a Kraňsku. To vyvolalo válku s Oldřichovým bratrem Filipem i s uherským králem Štěpánem V., která skončila bratislavským mírem v roce 1271 a potvrzením Přemyslovy držby alpských zemí. Roku 1273 byl římským králem zvolen Rudolf I. Habsburský, což vyvolalo Přemyslův odpor a vyústilo ve válečný konflikt s Říší. V roce 1278 bylo vojsko Přemysla Otakara II. v bitvě na Moravském poli poraženo, a panovník byl zabit.
V letech 1278 - 1283 byly Čechy okupovány Otou Braniborským, Morava Rudolfem Habsburským a Kladsko Jindřichem Vratislavským. Poručnictví nad následníkem českého trůnu, sedmiletým Václavem II., převzal Ota Braniborský, jehož vojsko drancovalo české území. Roku 1283 zástupci zemské šlechty docílili návratu Václava II. a skončení braniborské okupace. Mladý panovník se oženil s Gutou Habsburskou, dcerou římského krále Rudolfa I., a s podporou spojenců obnovil svou panovnickou svrchovanost. Za jeho vlády (v letech 1283 – 1305) pokračovalo zakládání měst a hradů, v Kutné Hoře došlo k objevu ložisek stříbra, jejichž využití přispělo k dalšímu rozmachu českého království. Václav II. získal Chebsko, říšská léna v severozápadním sousedství Čech a svrchovanost nad slezskými knížaty. Roku 1300 docílil své korunovace na polského krále, což podpořil svým druhým sňatkem s Eliškou Rejčkou, dcerou Přemysla II. Velkopolského. Po vymření rodu Arpádovců se Václav II. pokusil o ovládnutí Uher, kam byl v roce 1301 na královský trůn dosazen jeho prvorozený syn Václav III. Na popud rodu Anjouovců a papeže Bonifáce VIII. se však zvedl odpor proti přemyslovskému ovládnutí Uher, Václav III. musel roku 1304 odejít ze země, a do Čech vpadlo vojsko římského krále Albrechta I. Habsburského, které bylo poraženo u Kutné Hory. V roce 1305 zemřel král Václav II., a vládu v Čechách a Polsku převzal Václav III. Mladý panovník se snažil potlačit odboj části polské šlechty, ale během příprav na vojenské tažení byl roku 1306 v Olomouci zavražděn. Touto tragédií vymřel rod Přemyslovců po meči, a tak bylo ukončeno celé jedno období českých středověkých dějin.